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碳代谢抑制因子 cre1 介导的深绿木霉 T23 生长特性研究

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Title: 碳代谢抑制因子 cre1 介导的深绿木霉 T23 生长特性研究 Authors: 周, 于聪; 谢, 秋瑾 Abstract: 木霉菌(Trichoderma.spp)是土壤和植物根际生态中资源丰富的真菌,具有重要的生防价值。已 有研究发现木霉菌碳代谢抑制子 Cre1 全局性调控细胞生长代谢过程,保障其不同生境中的存活及 拮抗病原菌特性。本研究以拮抗深绿木霉 T.atroviride 23 为研究对象,采用生物信息学和分子遗传 操作相结合策略,首先通过 T23 菌株基因组全序列分析,查找到 Cre1 的 DNA 序列和其侧翼序列, 与 Genebank 同源比对,cre1 全长 1217kb, 与瑞氏木霉 Cre1 同源性达 100%。再根据同源重组的原 理,克隆 cre1 基因侧翼序列,在 pC1300qh 质粒上构建基因敲除框,用根瘤农杆菌介导的方法 (ATMT)获得具有潮霉素抗性的 cre1 敲除突变株。比较突变株与野生株在 PDA 生长的表型,发 现 cre1 基因敲除后,气生菌丝变少,产孢时间滞后,产孢量下降。表明:深绿木霉 cre1 基因调控 菌丝的生长和菌丝的发育,优先利用葡萄糖促进菌丝生长和孢子产量提高。通过比较不同营养基中, 发现 cre1 介导的产孢数量的变化,在氮源丰富的培养基中 cre1 敲除突变菌株产孢数量明显减少。

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